單細胞的高通量微液滴測序Drop-seq技術(shù)是可分析數(shù)千個單細胞的快速應(yīng)用方法,可將各細胞包裹在納升級微滴中,進行RNA雜交生成mRNA轉(zhuǎn)錄物,進行后續(xù)的測序分析。
液滴微流控Drop-Seq技術(shù)的應(yīng)用可將細胞懸浮液與帶有分子條形碼的微珠懸浮液泵匯合并形成層流,再與油相匯合形成單層流,然后再通過與油液相混合形成單分散的微滴,包裹住細胞和小球,完成核糖核酸的雜交,分解微滴,釋放核糖核酸雜交物,制備細胞基因表達譜,進一步分析mRNA逆轉(zhuǎn)錄的來源。
單細胞高通量微液滴測序的操作方法:
1.準備樣品:從組織中分離細胞,制備細胞浮游液的分子條形碼的微珠浮游液。
2.制備微滴:將細胞浮游液和微珠浮游液泵送到芯片上,與油聚集形成單分散的微滴,將各細胞和微珠一起包裹在同一微滴中進行測序。
3.細胞RNA的雜交:裂解微滴內(nèi)的細胞,會釋放出其mRNA,并與其分子條形碼進行雜交。
4.分子細胞的逆轉(zhuǎn)錄:分解微滴,釋放mRNA的雜交,開始逆轉(zhuǎn)錄,形成mRNA的逆轉(zhuǎn)錄STAMPS。
5.PCR的擴張:在核酸外切酶的作用下,將各mRNA的逆轉(zhuǎn)錄像物切斷,用PCR擴張核酸,擴大其基因信息。
6.序列分析:使用各種生物信息工具對其進行序列分析測序。
液滴微流控制程序可通過快速分離微小體積樣品,從而實現(xiàn)對數(shù)千個細胞的平行高通量分析,通常每秒可以產(chǎn)生1000個微滴,每個微粒的體積只有1nL,降低了實驗成本。